黑熱病快速檢測卡（美國INBIOS）

預期使用

    該檢測條用于診斷內臟利什曼病，利用快速的免疫層析法在人血清中定性檢測杜氏利什曼原蟲(chóng)（L. donovani）抗體。該實(shí)驗有助于診斷內臟利什曼?。?/span>VL）。并只用于體外診斷。

實(shí)驗原理

  該檢測條的硝化纖維膜在實(shí)驗區包被了rK39，在質(zhì)控區包被了雞抗蛋白A。在實(shí)驗中，血清樣本與膠體金共軛物（膠體金標記的蛋白A）反應，而膠體金共軛物預先包被在檢測條上?；旌衔镌诿毠茏饔孟卵刂?zhù)硝化纖維膜移動(dòng)，然后與重組的VL抗原反應，并生成一條紅色帶。如果存在該紅色帶表明陽(yáng)性結果，反之則為陰性結果?；旌衔锢^續移動(dòng)，到達固化的雞抗蛋白A區（質(zhì)控區），會(huì )在質(zhì)控區生成一條紅色帶。質(zhì)控區紅色帶的出現說(shuō)明樣本體積充足、液體流動(dòng)適宜和作為對試劑的質(zhì)控。

保存方法

    該密封袋或者瓶中含實(shí)驗檢測條應保存在20—28℃（室溫）直至有效期。瓶中含捕獲緩沖液也應保存在20—28℃。暴露在超過(guò)30℃溫度下會(huì )影響實(shí)驗性能，所以應盡量避免。檢測條不應冰凍保存。從密封袋中取出后應在1小時(shí)內使用，避免受濕度影響。

血清的采集

1該實(shí)驗中應使用人血清。全血樣本不應采用，因為過(guò)度的背景可能會(huì )影響正確讀取實(shí)驗帶。應使用緩沖液稀釋血清，避免直接開(kāi)始實(shí)驗。陽(yáng)性血清應使用陰性血清進(jìn)行稀釋。

2 經(jīng)凝血后離心分離血清，盡量避免溶血。

3 應在采集血清后盡快開(kāi)展實(shí)驗。血清不能長(cháng)時(shí)間存放在室溫下。血清于2-8℃可保存3天。否則血清應保存在20℃以下。

4 實(shí)驗前血清平衡至室溫。冰凍的血清必須充分融解。血清避免反復凍融。

5 如果血清需要運輸，其包裝應該符合聯(lián)邦的傳染源運輸法規。

試劑盒成分

該黑熱病快速檢測條的硝化纖維膜在實(shí)驗區包被了重組的rK39，在質(zhì)控區包被了雞抗蛋白A。試劑盒的成分如下：

1、25份的獨立包裝檢測條或者25份檢測條于一個(gè)含干燥劑瓶子中。

2、1瓶的捕獲緩沖液

實(shí)驗步驟

1 實(shí)驗前讓血清平衡至室溫。

2 從密封袋或瓶中取出黑熱病快速檢測條

3 在檢測條箭頭下方加入20 ul的血清。

4 將檢測條置于實(shí)驗管中，或者96孔的組織培養板的微孔中，根據檢測條上的箭頭，其末端應該朝下。

5 加入2-3滴（150ul）的捕獲緩沖液

6 在10分鐘內讀取結果。在讀取結果前，背景的清晰是十分重要的。尤其是當樣本為低滴度的抗利什曼原蟲(chóng)抗體時(shí)，就只有一條很弱的色帶出現在實(shí)驗區（T）。10分鐘后讀取可能會(huì )導致錯誤結果。

注意：不要只是加入捕獲緩沖液進(jìn)行實(shí)驗。必須首先加入20ul的血清。

      如果在加入捕獲緩沖液后的10-15秒并沒(méi)有觀(guān)察到膠體金的移動(dòng)，可輕輕壓檢測條上的樣本加入區，直到觀(guān)察到膠體金的移動(dòng)。

結果解釋

陽(yáng)性結果

實(shí)驗陽(yáng)性則質(zhì)控帶和實(shí)驗帶均出現，如圖1。陽(yáng)性結果表明檢測到杜氏利什曼原蟲(chóng)抗體。一條微弱的色帶也為陽(yáng)性結果。作為解釋指南，實(shí)驗區的紅色帶的顏色強度與抗利什曼原蟲(chóng)抗體濃度相關(guān)。實(shí)驗帶為“弱陽(yáng)性”血清樣本，實(shí)驗結果可能為弱陽(yáng)性紅色帶與紅點(diǎn)之間，幾乎為白色背景（“弱陽(yáng)性”樣本則含有對重組抗原低親和力或者低滴度抗體）。

陰性結果

實(shí)驗為陰性，則只有質(zhì)控帶出現。一個(gè)陰性結果表明無(wú)檢測到杜氏利什曼原蟲(chóng)抗體。沒(méi)有出現實(shí)驗帶，如圖2。

無(wú)效結果

則無(wú)出現質(zhì)控帶也沒(méi)有出現實(shí)驗帶。如果沒(méi)有出現質(zhì)控帶該實(shí)驗也無(wú)效，即使出現了實(shí)驗帶。建議使用新的檢測條和新血清再次進(jìn)行實(shí)驗。

注意：實(shí)驗區的紅色帶的變化是依賴(lài)于抗利什曼原蟲(chóng)抗體濃度。然而，該實(shí)驗不能檢測抗體的定量值和增加的百分比。

預期值：

在流行的地區，該黑熱病快速檢測條靈敏度為90%或更高。而特異性可能因不能地區而不同。例如在印度104名健康人中超過(guò)13名為陽(yáng)性反應。

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