水痘帶狀皰疹病毒IgG試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

1、應用范圍

此酶免試劑盒可用于人血清和血漿中抗水痘-帶狀皰疹病毒IgG抗體的體外定性和定量檢測。

2、前言說(shuō)明

水痘是一種由屬于皰疹病毒科的水痘帶狀病毒所引起的急性病毒性疾病。這種眾所周知的疾病開(kāi)始表現為發(fā)燒，渾身不舒 服，斑丘疹，這種斑丘疹幾個(gè)小時(shí)之后就變成小泡。身上這些膿泡會(huì )變硬，要整整3周才能慢慢痊愈。這種疾病很少造成死亡，但是在成年人中，造成死亡最常見(jiàn)的 原因是原發(fā)性病毒性肺炎，在兒童中是續發(fā)性細菌性感染或涉及中樞神經(jīng)系統的感染。有急性白血病或免疫抑制的兒童感染這種疾病并致死的危險性更高。新生兒在 其出生5大10后就可以被感染，在出生前5天或出生后兩天被感染的嬰兒可發(fā)展成嚴重的無(wú)典型特征的水痘，這種水痘有30%的死亡率。而在早孕期感染的嬰兒 一般不會(huì )造成先天性畸形。水痘病毒再活化通常表現為帶狀皰疹。帶狀皰疹通常首先表現為單側劇烈或輕微的局部疼痛。在這種情況下，IgG抗體的濃度就增加 了，而IgM抗體的濃度僅在某些情況下才會(huì )增加。

3、實(shí)驗原理

此固相ELISA試劑盒利用的夾心法原理。包被板上包被了抗原。用對人IgG具有特異性的酶標二抗來(lái)檢測結合到包被抗原的樣品特異性抗體。底物反應后，所顯示的顏色強度與檢測到的IgG特異性抗體的量成正比。樣品的結果可直接使用標準曲線(xiàn)得。

4、試劑盒組成：

4×2ml	標準品A-D	1；10；30；150U/mL，待用 標準品A=陰性質(zhì)控           標準品B=臨界質(zhì)控 標準品C=弱陽(yáng)性質(zhì)控         標準品D=陽(yáng)性質(zhì)控 內含抗水痘病毒的IgG抗體，PBS（磷酸緩沖液），穩定劑。
1×14ml	酶標IgG	紅色，待用。內含過(guò)氧酶標記的抗人IgG，蛋白緩沖液，穩定劑。
1×12×8	包被板	可拆，包被有特異性抗原。
1×14ml	TMB底物液	含TMB
1×14ml	TMB終止液	0.5M的H2SO4
1×60ml	稀釋液	含PBS緩沖液，＜0.1%NaN3
1×60ml	濃縮洗滌液	濃縮型（10×），含PBS緩沖液，吐溫20
2×	粘性金屬板	用于在溫育時(shí)遮蓋包被板
1×	塑料袋	用于儲存不用的板條

5、實(shí)驗所需材料但試劑盒不提供

1)       移液器，體積：5；50；100；500 μL

2)       校準儀

3)       樣品稀釋用試管（1ml）

4)       帶試劑儲器8道移液器

5)       洗滌瓶，自動(dòng)或半自動(dòng)洗板機

6)       能在450nm處讀數的酶標儀

7)       雙蒸水或去離子水

8)       吸水紙，取樣吸頭和計時(shí)器

6、實(shí)驗前的準備說(shuō)明

6.1成分準備

稀釋/溶解	成分		稀釋液	比例	備注	貯存	穩定性
60ml	洗滌液	加600ml	雙蒸水	1：10	加熱至37℃以溶解結晶，充分混合	2-8℃	8周

6.2樣品稀釋

樣品	稀釋	稀釋液	比例	備注
血清/血漿	全部稀釋	稀釋緩沖液	1：101	例：5μL+500μL

7、實(shí)驗步驟：

1)       加100μL標準品、質(zhì)控品或已稀釋樣本于相應反應孔中，在定性檢測中只使用標準品B。

2)       封板后室溫（18℃-25℃）溫育60分鐘。

3)       移去粘性金屬板，棄去孔中液體。用300μL洗滌液洗板3次，在吸水紙上拍干。

4)       在每一微孔中加入100μL酶聯(lián)物。

5)       封板后室溫（18℃-25℃）溫育30分鐘。

6)       移去粘性金屬板，棄去孔中液體。用300μL洗滌液洗板3次，在吸水紙上拍干。加底物液和終止液時(shí)，如果有條件的話(huà)，可使用8孔微量移液器。確保底物液和終止液都是相同的時(shí)間間隔加入。使用確切容積并避免氣泡產(chǎn)生。

7)       每孔加TMB底物液100μL。

8)       室溫（18℃-25℃）避光溫育20分鐘。

9)       在每一微孔中加入100μLTMB終止液以終止底物反應。輕輕搖動(dòng)包被板以使試劑混合均勻。此時(shí)，顏色藍色變成黃色。

10)    加終止液后60分鐘內在450nm處測OD值。

8、結果計算

在半對數坐標紙上或用自動(dòng)生成的方法，以標準品的OD值為Y軸，濃度為X軸，繪制一標準曲線(xiàn)圖。用立體圖、4參數對 數圖或對數-對數圖都可獲得良好的實(shí)驗結果。對于標準曲線(xiàn)圖，用標準品的每一單值進(jìn)行計算（樣品結果明顯異常的值必須刪除掉，應使用更加合理的單值）。樣 品的濃度可直接從標準曲線(xiàn)上獲得。一旦樣品稀釋了，就應當乘以相應的稀釋因子。如果樣品所測得的濃度高于最高標準，則應根據實(shí)驗前的準備說(shuō)明所述對樣品進(jìn) 行稀釋?zhuān)⒅匦聶z測。

9、結果判定：

                  ＞12 U/ml  為陽(yáng)性

                  8 - 12 U/ml  為可疑

                  ＜ 8 U/ml  為陰性

此檢測結果并不是任何治療結果判定的唯一因素，它應當結合臨床觀(guān)察和診斷結果加以判斷。

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